Biyolojik Örnek Alma
Mikrobiyolojik Örnek Toplama & Preanalitik Süreç
Kan kültürü, BOS, idrar, balgam, yara ve diğer biyolojik örneklerin doğru alınması, etiketlenmesi, saklanması ve laboratuvara ulaştırılması; preanalitik hataların önlenmesi.
Giriş & Temel İlkeler
Türkiye Güvenlik Raporlama Sistemi verilerine göre laboratuvar hatalarının %75,79'u preanalitik aşamada gerçekleşmektedir. Bu oran, örnek alımı, etiketleme ve transport süreçlerinin ne denli kritik olduğunu ortaya koymaktadır.
- Antibiyotik başlanmadan önce alınmalı — veya mevcut antibiyotik dozunun hemen öncesinde
- Gerçek enfekte bölgeden alınmalı; komşu veya yüzeyel kontaminasyon riski taşıyan bölgelerden kaçınılmalı
- Zamanı infeksiyonun evresine göre ayarlanmalı (akut dönem, ateş pikinden önce)
- Miktarı infeksiyon tipine ve istenilen kültüre göre değişir
- Steril koşullarda, uygun kültür kaplarına alınmalı
- Örnek kapları kaçaktan korunmalı; etiketsiz, hasarlı veya kirlemiş kaplar reddedilir
- Tetkik bilgisi (klinik tanı, antibiyotik kullanımı) laboratuvara iletilmeli
- Etiketsiz veya yanlış etiketli örnek
- Transport süresinin aşılması (örneğin idrar, dışkı, genital örnekler >1 saat beklenmiş)
- Nonsteril veya delik kapta gönderilme
- Yetersiz miktarda örnek
- Uygun taşıma vasatı kullanılmamış örnek
Kan Kültürü
Sepsis düşünüldüğü andan itibaren antibiyotik tedavisindeki her 1 saatlik gecikme %8,4 mortalite artışına yol açmaktadır. Kan kültürü alımı, tedaviyi geciktirmemelidir; mümkünse eş zamanlı alınmalı ve antibiyotik derhal başlanmalıdır.
- Tek bir damar girişimiyle alınan kanın dağıtıldığı kültür şişelerinin tümü = 1 set
- Bir aerobik şişe + bir anaerobik şişe = 1 set (her şişeye 10 mL, toplam 20 mL)
| Klinik Durum | Önerilen Set Sayısı | Alım Önerisi |
|---|---|---|
| Primer bakteriyemi/fungemi şüphesi | 2 set | İki set farklı damardan peşpeşe alınır |
| Menenjit, osteomiyelit, artrit, pnömoni, abdominal sepsis | 2–3 set | 3 set farklı damarlardan veya 4–6 saat arayla üçüncü set |
| Protez kapak endokarditi, enfekte endovasküler cihaz | 4 set | 24 saatte 4 set; 24 saat sonra üreme yoksa 1–2 set daha |
| Sebebi bilinmeyen ateş | 4 set | 24 saatte 4 set; 24 saat sonra üreme yoksa 1–2 set daha |
| Enfektif endokardit | 5–6 set | İlk 24 saatte farklı zamanlarda; hasta ağırsa 1 saatte 3 ayrı setten |
- Alınan kan hacmi, etken mikroorganizmanın saptanmasını etkileyen en önemli faktördür
- Hacim arttıkça: etken izolasyon olasılığı artar, kontaminasyon sıklığı azalır, kültürün pozitifleşme süresi kısalır
- Erişkinde her set için optimal: 20–30 mL (aerobik şişeye 10 mL, anaerobik şişeye 10 mL)
- Çocuklarda hacim vücut ağırlığına göre değişir (bkz. tablo)
- Yenidoğanlarda: yeterli hacimde (≥1 mL) tek şişe yeterli; set sayısı artırmak izolasyon oranını artırmaz
- Kanda mikroorganizma konsantrasyonu en yüksek olduğu dönem: ateş çıkmasından önceki 30–60 dakika
- Ateş yükselmeye başladıktan sonra en kısa sürede alınmalı
- Hasta antibiyotik kullanıyorsa: bir sonraki dozdan hemen önce
- Kateter infeksiyonu (KİKDE) dışında kateter ve kanüllerden kan alınmamalı
- KİKDE şüphesinde: kateterden alınan kültür mutlaka periferik bir venden alınanla eşleştirilmeli
- Adım 1: Seçilen bölge %70 izopropil alkollü steril gazlı bezle ileri-geri sürtülerek en az 30 saniye silinir → 30 saniye kuruması beklenir
- Adım 2: %1–2 iyod tentürü / %10 povidon iyodin / %2 klorheksidin glukonatlı steril gazlı bezle merkezden dışa doğru silinir
- Bekleme süresi: İyod tentürü ve povidon iyodin 1–2 dakika; klorheksidin glukonat 30 saniye
- Çocuklarda: %70 izopropil alkol ile iki kez 30 saniye uygulama; iyot kullanılmaz
Şişenin lastik tıpası steril değildir; her zaman %70 alkol ile silinmeli ve kuruması beklenmelidir. Şişeler; hastanın adı-soyadı, alım tarihi-saati ve alındığı bölge bilgisiyle (sağ kol/sol kol, kateter/perifer) etiketlenmelidir. Şişeler laboratuvara en geç 2 saat içinde, oda sıcaklığında ulaştırılmalı; buzdolabına konulmamalıdır.
BOS Örneği
- Bölge %70 etanol veya %10 povidon iyot ile sterilize edilir
- L3–L4, L4–L5 veya L5–S1 aralığından lomber ponksiyon yapılarak alınır
- 3 adet steril, kapaklı tüp; her birine en az 1–2 mL BOS
- Tek BOS tüpü alındıysa → mikrobiyoloji laboratuvarına; birden fazla tüp → ikinci tüp mikrobiyoloji laboratuvarına
- Oda ısısında, 15 dakika içinde laboratuvara ulaştırılmalı
- BOS kültürleri ile eş zamanlı olarak kan kültürü alınması önerilir
BOS örnekleri KESİNLİKLE buzdolabına konulmamalıdır. Soğukta pnömokok ve meningokok gibi kapsüllü bakteriler hızla parçalanır ve kültür negatifleşir.
İdrar Kültürleri
- Sabahın ilk idrarı önerilir; mesanede en az 4 saat beklemiş olmalı
- İdrar vermeyi çabuklaştırmak için aşırı sıvı alımı önerilmez
- Kadınlarda: bir el ile labiumlar açık tutularak üretral ve vaginal bölge, sabunlu su ile ıslatılmış gazlı bezle önden arkaya silinir, su ile durulanır; benzalkonium veya heksaklorofen kullanılmaz
- Erkeklerde: Sünnetli olanlarda ek işlem gerekmez; sünnetsizlerde glans penis sabunlu su ile temizlenip durulanır
- İlk idrar tuvalete, orta akım kültür kabına, son kısım tekrar tuvalete
- Kabin ya da kapağın iç yüzüne dokunulmamalı; sızdıran kaplar tehlike yaratır
- Bir saatte laboratuvara ulaştırılmalı; olmazsa +4°C buzdolabında 24 saate kadar
| Yöntem | Endikasyon | Önemli Notlar |
|---|---|---|
| Kateter ile alım | Kooperasyon sorunu, nörolojik/ürolojik defekt | İlk 15 mL atılır; kalan steril kaba; +4°C 24 saate kadar |
| Sürekli kateterden alım | Kalıcı kateter var (KİKDE değil) | Distalden 30 dk klemple; alkol ile sil; 5–10 mL aspire et; TORBADAN ALMA |
| Suprapubik aspirasyon | Anaerobik ÜSİ şüphesi, çocuk/bebek | Mesane dolu olmalı; simfizis pubis üzerinden 20 mL; gold standard |
İdrar torbası örneği kültür için kesinlikle uygun değildir — kolonize flora nedeniyle. Kateter ucunun kesilerek gönderilmesi de kontaminasyon riski nedeniyle uygun değildir. Renal tüberkülozda: 3 gün art arda sabahın ilk idrarı alınır.
Solunum Yolu Örnekleri
- Örnek almadan önce 3 saat ağızdan gıda alınmamalı; varsa diş protezi çıkarılmalı
- Ekspektore balgam alımından önce ağız steril su veya SF ile çalkalanır
- Antibiyotik başlanmadan önce steril kapaklı kaba alınmalı
- Spontan balgam çıkaramayanlar için indüklenmiş balgam: steril, ılık, aerosolize hipertonik tuzlu su (%10 NaCl) nebulizatör ile 10 dakika; örnek en az 10 mL olmalı
- İndüklenmiş balgam sulu göründüğünden "tükrük" olarak reddedilmemesi için etikette belirtilmeli
- <2 saat oda ısısında; 2 saati aşacaksa +2–8°C'de 24 saate kadar
- Gram boyamada x100'de >10 epitel hücresi görülen örnek reddedilir (tükrük ile contaminated)
- Rayon veya dacron uçlu, esneyebilir steril eküvyon kullanılır (influenza, COVID, Bordetella pertussis PCR için)
- Burundan nazofarinkse girilir; eküvyon 5 saniye bekletilerek yavaşça çevrilir
- Hasta başı ekim: ≤15 dk oda ısısı; kömürlü transport besiyerinde ≤6 saat oda ısısı
- PCR örnekleri +4°C'de 24 saate kadar saklanabilir
- Fleksibıl bronkoskop yardımıyla steril SF ile akciğer segmenti yıkanır
- En az 40–80 mL sıvı gerekli; başlangıçta gelen sıvı dışarı atılarak son kısım kültüre gönderilir
- <2 saat oda ısısında laboratuvara ulaştırılmalı
- Trakeostomili ve entübe hastalarda aspirasyonla steril burgulu kapaklı balgam kabına alınır
- <2 saat oda ısısı; 2 saati aşacaksa +2–8°C'de 24 saate kadar
Boğaz, Burun & Kulak Örnekleri
- Yeterli ışık kaynağı altında dil basacağı ile dile baskı uygulanır
- Steril eküvyon: dudak, yanak mukozası, uvula ve dile dokundurulmadan uvulanın arkasından iki tonsil arasından uzatılır
- Eküvyon ileri-geri olarak posterior farinks, tonsiller ve eksudatif alanlara sürülür
- Epiglot enflamasyonlu görülüyorsa örnek alınmaz (solunum yolu tıkanması riski)
- Hızlı antijen testi ile boğaz kültürü eş zamanlı isteniyorsa: çift eküvyon
- Transport besiyerinde ≤2 saat oda ısısı; saklama ≤24 saat oda ısısı
- Steril SF ile ıslatılmış eküvyon ile burun deliklerine 1–2 cm girilir
- Nazal mukozaya değecek şekilde örnek alınır
- Nemli eküvyon ile ≤2 saat oda ısısı, taşıyıcı besiyerinde
- Önce ıslatılmış eküvyon ile birikmiş sekresyon ve kurutlar temizlenir
- İkinci bir eküvyonla kanaldan örnek alınır; Gram boyama için ayrı üçüncü eküvyon
- Transport besiyerinde ≤2 saat oda ısısı; saklama +4°C'de 24 saat
Yara, Apse & Deri Örnekleri
- Önce debride edilmeli; yara yeri yüzeyel eksüda SF ile temizlenmeli
- Lezyon kuru ise eküvyon SF ile nemlendirilmeli
- Enfekte bölgeye sürtülen eküvyon kendi etrafında 5 kez döndürülerek örnek alınır
- Gram boyama, aerop kültür ve mantar kültürü için ayrı eküvyonlar kullanılmalıdır
- Eküvyonla alınan sürüntü örnekleri anaerop kültür için uygun değildir
- Transport besiyerinde ≤2 saat oda sıcaklığı
- Apse içeriği enjektör yardımıyla aspire edilir; yeterli alınamıyorsa apseye steril SF enjekte edilerek tekrar aspire edilir
- İdeal: en az 1 mL püy örneği
- Aerop kültür için 2–3 mL, anaerop kültür için 5–8 mL (<30 dakikada teslim)
- Kapalı apse: açılarak enjektörle, dipten alınır
- Yanık yarası: farklı alandan derin doku biyopsisi; punch biyopsi formaline alınmaz
- Sinüs ağzı bulunan yaralarda: eküvyon ucu aseptik şartlarda tünel içine sokulur ve en derin noktaya temas ettirilerek örnek alınır
- Ülseröz lezyonlar ve yanık enfeksiyonlarında: nekrotik doku altında canlı doku ile birleşim yerine yakın geçiş bölgesinden biyopsi önerilir
Gaita, Rektal Sürüntü & Diğer Örnekler
- Hastalığın erken döneminde, ilk 48–72 saat içinde, antibiyotik başlanmadan alınmalı
- Rutin kültür için 2–4 g; toksine bağlı gıda zehirlenmesinde 10 g dışkı veya 10–20 mL sıvı dışkı
- Geniş ağızlı, vidalı kapaklı, plastik, sızdırmaz, temiz kaba alınmalı; dışkı idrar ve su ile karışmamalı
- Salgın durumunda en az 3 hastadan örnek alınmalı
- Kültür örneği 30 dakikada laboratuvara ulaştırılmalı; olmazsa +4°C'de 24 saate kadar
- Hastanede 3 günden uzun süredir yatan hastada ishal: sadece C. difficile toksini istenmelidir, rutin dışkı kültürü gerekmez
- Eküvyon anal sfinkterden 1–2 cm ilerletilir; anal kriptlerden rotasyon yaptırıldıktan sonra geri çekilir
- Eküvyon ucunda mutlaka dışkı görülmelidir
- Sürüntü eküvyonu taşıma besiyerine daldırılır, tüp sıkıca kapatılır
| Örnek Tipi | Alım Yöntemi | Transport/Saklama |
|---|---|---|
| Plevra sıvısı | Torasentezle steril tüplere; kan kültürü şişelerine de inoküle edilebilir | Oda ısısı ≤2 saat; +4°C ≤24 saat |
| Eklem sıvısı | Steril şartlarda aspirasyon; kan kültürü şişesine de inoküle edilebilir | Oda ısısı ≤2 saat; +4°C ≤24 saat |
| Periton sıvısı (SBP) | Parasentezle; kan kültürü şişesine yatak başında inoküle edilmesi tanı duyarlılığını artırır | Oda ısısı ≤2 saat |
| Doku biyopsisi | Steril kaba, steril SF içinde; formaline alınmaz | Oda ısısı ≤2 saat; +4°C ≤24 saat |
| Genital örnekler | Uygun eküvyon ile; erkekte üretra, kadında endoserviks | Transport besiyerinde; oda ısısı ≤1 saat veya +4°C ≤24 saat |
Mandell 2025 — Genel Prensip: Preanalitik süreç, kültür sonucunun yorumlanmasını doğrudan etkiler. Kontaminasyon riski yüksek bölgelerden alınan örneklerde "yanlış pozitiflik", yetersiz veya geç gönderilen örneklerde ise "yanlış negatiflik" ortaya çıkabilir. Klinisyen-laboratuvar iletişimi bu nedenle vazgeçilmezdir.
Klinik Rehberler
Kan kültürü alım tekniği, set sayısı, hacim, cilt antisepsisi ve transport için uluslararası referans kılavuzu. Laboratuvar standartları ve preanalitik süreç yönetimi için temel kaynak.
Tam Metni GörüntüleBiyolojik örnek alım ve işleme sırasında biyogüvenlik önlemleri, kişisel koruyucu ekipman kullanımı ve risk değerlendirmesi için CLSI rehberi.
Tam Metni GörüntüleAvrupa Klinik Mikrobiyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları Derneği'nin kan kültürü kontaminasyonunu azaltmaya yönelik kanıta dayalı önerileri. Cilt antisepsisi, set sayısı ve kontaminasyon tanımına ilişkin güncel kılavuz.
Tam Metni GörüntüleCDC'nin çeşitli klinik örneklerin (kan, solunum yolu, idrar, dışkı) alım yöntemleri, transport koşulları ve laboratuvara gönderim protokollerini kapsayan kapsamlı kılavuzu.
Tam Metni GörüntüleTürkiye Halk Sağlığı Genel Müdürlüğü tarafından hazırlanan ulusal rehber; kan kültürü, BOS, solunum yolu, idrar ve dışkı örneklerinin alınması, taşınması ve laboratuvarda işlenmesine ait Türkiye özelinde standartları içermektedir. Enfeksiyon hastalıkları klinik pratiğinde başvuru kaynağı niteliğindedir.
Tam Metni GörüntüleŞikâyet: 68 yaşındaki erkek hasta, KOAH nedeniyle 5 gündür YBÜ'de yatmaktadır. Saatler içinde ateş yükselmesi (39.2°C), taşikardi (110/dk), hipotansiyon (85/55 mmHg) ve bilinç bulanıklığı gelişti. Sol klavikula altına 3 gün önce santral venöz kateter (SVK) takılmış.
Yardımcı Tetkikler: WBC: 18.200/mm³, CRP: 214 mg/L, Procalsitonin: 18 ng/mL. Akciğer grafisinde sol bazal infiltrasyon.
Üç kritik preanalitik hata saptanmaktadır:
- Hata 1 — Antibiyotik sonrası örnek: Kan kültürü, antibiyotik başlandıktan 30 dakika sonra alınmış. Antibiyotikler, bakterileri hızla öldürerek kültür pozitifliğini azaltır. Örneğin meropenem gibi hızlı bakterisidal bir ilaç verilmişse üreme olasılığı belirgin düşer.
- Hata 2 — SVK'dan kan kültürü: Kateter infeksiyonu (KİKDE) şüphesi dışında, SVK'dan alınan kan kültürü periferden alınana göre çok daha fazla kontamine olur. Ayrıca KİKDE şüphesinde bile periferik venden alınan eş zamanlı kan kültürüyle karşılaştırılmalıdır.
- Hata 3 — İdrar torbası ve ağız salgısı: İdrar torbası kolonize florayı yansıtır; kültür için uygun değildir. Ağız içi salgı ise gerçek alt solunum yolu balgamı değildir — bu örnekte epitel hücresi yüklü "tükrük" reddedilecektir.
Sepsis şüphesinde örnek alma planı — antibiyotikten ÖNCE:
- Kan kültürü: 2 farklı periferik venden 2 set (her set: 1 aerobik + 1 anaerobik şişe; erişkinde 10 mL/şişe). SVK'dan KİKDE değerlendirmesi için eş zamanlı ek bir set alınabilir, ancak tek başına yeterli değildir.
- İdrar kültürü: Hasta kateterli olduğundan: kateter distalinden 30 dk klemple sonrası steril enjektörle 5–10 mL aspire edilmeli. Kateter yeni (48–72 saat içinde) takılmışsa doğrudan steril kateter idrara alım da yapılabilir.
- Balgam/solunum yolu: Entübe ise trakeal aspirat (steril kaba); entübe değilse derin öksürükle ekspektore balgam; öksüremiyorsa indüklenmiş balgam veya bronkoskopi değerlendirmesi.
KİKDE şüphesinde kan kültürü protokolü:
- Kateterden alınan kan kültürü mutlaka periferik bir venden alınan kan kültürüyle eşleştirilmelidir
- Diferansiyel Time-To-Positivity (DTTP): kateterdeki şişe, periferdekinden ≥2 saat önce pozitifleşirse KİKDE lehine
- Kantitatif kültür: kateterden ≥3:1 oranında daha yüksek koloni sayısı KİKDE'yi destekler
- Kateter çıkarılmadan örnekler alınmalı; şüphe yüksekse kateter çıkarılıp ucu kültüre gönderilmeli
| Bulgу | KİKDE Olasılığı |
|---|---|
| Kateterden kan kültürü ≥2 saat önce pozitif | Yüksek (DTTP pozitif) |
| Yalnızca kateterden kan kültürü pozitif | Kontaminasyon veya kolonizasyon |
| Hem kateter hem periferden aynı ajan üremesi | Primer bakteriyemi veya KİKDE |
| Kateter çıkarma sonrası ateş düşmesi | KİKDE güçlü kanıt |
KNS'nin yorumlanması: Cilt florası olması nedeniyle sık kontaminasyon etkenidir; ancak protez kapak endokarditi, SVK enfeksiyonu gibi durumlarda gerçek etken olabilir.
- Kontaminasyon lehine: Yalnızca 1 şişede üreme; klinik tablo hafif; başka odak yok; antibiyotik almadan düzelme
- Gerçek enfeksiyon lehine: ≥2 farklı setten aynı KNS; kateter veya protez varlığı; yüksek klinik şüphe; aynı antibiyogram profili
Balgam kalite kriterleri (Gram boyama ile):
- Yüksek kaliteli balgam: x100 büyütmede <10 epitel hücresi + >25 polimorfonükleer lökosit (PMNL)
- Reddedilmeli: x100 büyütmede >25 epitel hücresi → tükrük ile kontamine, kültür güvenilmez
- Makroskopik değerlendirme: pürülan (sarı-yeşil) balgam kabul; berrak, sulu görünüm → tükrük şüphesi